二尖瓣腱索一端附着于瓣叶的边缘和心室面，另一端附着于乳头肌顶部并有少数直接连于左心室后壁肌肉。腱索分3组：一组为分布在瓣叶边缘，较细、数目较多，主要防止左心室收缩时瓣膜向左心房翻转；一组附于前瓣叶心室面，较粗、数目少，又称主腱索，它通常起自前外侧、后内侧乳头肌的顶端，止于前瓣叶后内侧4～5点及前外侧7～8点，后瓣叶无此腱索；另一组为2条交界腱索。